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如何制备HEPES缓冲液?这里有多种方法!
发布时间:2021-07-13   点击次数:51次

Hepes是一种通用的两性离子缓冲剂,不结合镁,钙,锰或铜离子。其中细胞培养应用的缓冲液强度通常在10至25mm之间,在加入Hepes后,用NaOH或HCl调节pH。必须注意保持培养基中的重量克分子渗透压浓度,并且需要评估对于给定细胞系的毒性。根据文献得到,HEPES在控制pH方面优于碳酸氢钠。

Hepes的缓冲液可以通过好几种方法来制备,可以将游离酸添加到水中,然后用大约一半摩尔当量的氢氧化钠或氢氧化钾滴定至所需的pH。或者,相等摩尔浓度的Hepes和Hepes钠盐,可以将它们以大约相等的体积混合,然后用任一种溶液反滴定至合适的pH。可以用HCL滴定钠盐,得到一半当量的氯化钠。但是,离子强度的增加会改变溶液的重量克分子渗透压浓度。Hepes半钠的大多数溶液都会溶解在水中,形成pH值7.5,几乎不用做调整。

Hepes缓冲盐水(2X)的俩种配方:

1、氯化钠1.6克

lv化钾0.074克

Na2HPO4二水合物0.027克

葡萄糖0.2克

HEPES,游离酸1克

将上述成分溶解在总体积为90毫升的蒸馏水中,用0.5 N NaOH调节pH到7.05,然后调节用蒸馏水定容至100毫升。通过0.22微米的过滤器对溶液进行灭菌,分装在-20°C下。

2、氯化钠16.4克

HEPES,游离酸11.9 g

Na2HPO4 0.21克

水 1升

加入上述成分并搅拌直至溶解,用5 M NaOH滴定至pH 7.05(准确的pH值非常重要),筛选消毒。

在与转染实验一起使用之前测试制剂,通过将0.5 ml的上述缓冲液与0.5 ml的250 mM CaCl2混合并涡旋进行测试。应形成细的沉淀物,该沉淀物在显微镜下很容易看到。如果没有形成沉淀,不要将这批缓冲液用于转染实验。

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